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英文名称:CF620R Tyramide Conjugates; CF620R TSA Conjugates
中文名称:CF620R Tyramide共轭物;CF620R Tyramide结合物
Ex/Em: 620/643 nm
规格:5mg,10mg,25mg
纯度:95%+
二、功能结构与组成CF620R Tyramide Conjugates 是一种基于酪胺信号放大(TSA)技术的高灵敏度荧光标记试剂,主要用于免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)和荧光原位杂交(FISH)等应用。
展开剩余79%结构组成
CF620R Tyramide Conjugates 的核心结构由两部分组成:
CF620R 染料:一种高性能近红外荧光染料,属于 Biotium 公司的 CF® Dye 系列。其光谱特性为最大吸收波长 617 nm,最大发射波长 639 nm,分子量为 738,摩尔吸光系数为 115,000 M⁻¹cm⁻¹。该染料具有高水溶性、高荧光强度和优异的光稳定性。
酪胺(Tyramide)分子:通过共价键(如酰胺键)与 CF620R 染料的活化酯(如 NHS 酯)连接,形成酪胺-染料偶联物。
酪胺在过氧化物酶(HRP)催化下可发生氧化反应,与目标蛋白或核酸附近的酪氨酸残基共价结合,实现信号放大。
三、CF620R Tyramide Conjugates,多色荧光成像的原理和步骤CF620R Tyramide Conjugates 是一种基于酪胺信号放大(TSA)技术的高灵敏度荧光标记试剂,专为多色荧光成像设计。其核心原理是利用辣根过氧化物酶(HRP)在过氧化氢(H2O2)存在下催化酪胺-荧光染料偶联物(如 CF620R),生成高反应活性的自由基中间体,这些自由基与目标蛋白附近的酪氨酸残基共价结合,实现信号指数级放大。
CF620R 是一种远红光罗丹明类染料,激发/发射峰值为 620/643 nm,具有高亮度、优异的光稳定性和水溶性,适用于多色成像中远红光通道的标记。
多色荧光成像原理
多色成像通过在不同波长下检测多种靶标,实现对复杂生物样本的多参数分析。TSA 技术通过分轮标记策略实现多重检测:每轮标记针对一个特定靶标,使用 HRP 偶联的一抗或二抗,搭配特定荧光波长的酪胺偶联物(如 CF620R 用于远红光通道)。每轮标记后通过微波处理或酸洗去除抗体,仅保留共价结合的酪胺信号,从而避免通道间交叉反应。
多色成像需谨慎选择荧光染料组合,确保各通道光谱无重叠,并通过顺序优化避免信号干扰。
操作步骤(以组织样本为例)
样本预处理
固定(如 4% 多聚甲醛)、透化(0.1% Triton X-100)和封闭(1% BSA 或血清)样本,以降低非特异性背景。
第一轮标记
孵育靶标 A 的一抗(如小鼠来源),4℃ 过夜。
清洗后加入 HRP 偶联的二抗(如抗小鼠-HRP),室温孵育 1 小时。
制备 CF620R 酪胺工作液(用含 0.0015% H₂O₂ 的缓冲液稀释),室温反应 5–10 分钟。
信号放大与抗体去除
微波处理(柠檬酸盐缓冲液,10 分钟)或酸洗以彻底去除抗体,避免后续轮次交叉反应。
重复标记
按上述步骤进行后续轮次标记,更换为其他靶标的一抗和不同荧光波长的酪胺偶联物(如 CF488A 用于绿光通道)。
复染与成像
使用 DAPI 或 Hoechst 复染细胞核。
抗淬灭封片后,用多通道荧光显微镜采集图像。需针对 CF620R 设置远红光滤片组(激发/发射约 620/643 nm)。
四、关联试剂DMG-PEG-Fluorescein
BODIPY 650-X, SE
AF514 NHS Ester
BODIPY 650-X
AF594-Annexin V
IR 650 Picolyl Azide
IR 650 Maleimide
MB 594 Maleimide
AF488-Concanavalin A
AF594-Concanavalin A
Mal-amido-PEG9-amine
AF594 C5 Maleimide
Silane-PEG-Cyanine5.5
DOPE-PEG-Indocyanine Green
Phospholipids-PEG-TK-Fluorescein
(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)
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